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紫外分光光度法快速測定慶大霉素C1a含量在高通量篩選中的應用

作者:admin 發布時間:2019/04/10 瀏覽量:4089

本期為您推薦華東理工大學生物反應器工程國家重點實驗室莊英萍研究團隊發表在《中國抗生素雜志》上的一篇文章:紫外分光光度法快速測定慶大霉素C1a含量在高通量篩選中的應用。

文章摘要內容如下:

慶大霉素C1a是慶大霉素單組分之一,是合成依替米星的重要前體物質,依替米星具有抗菌活性高、療效好、低毒性等優點而備受關注。目前慶大霉素C1a主要通過慶大霉素多組分分離純化得到。近年來關于成功獲得高產菌株的報道很多,但是關于慶大霉素單組分C1a生產菌誘變和高通量篩選的相關文獻很少。

本研究為探索慶大霉素C1a含量的快速檢測方法,實現誘變菌株的高通量篩選,以紫外分光光度法作為檢測慶大霉素C1a含量的手段,對慶大霉素C1a單組分生產菌株進行ARTPLiCl、微波和ARTP+LiCl誘變,通過高通量篩選獲得高產菌株,并在5L發酵罐中對高產穩定性菌株進行驗證。結果表明,紫外分光光度法和高效液相色譜法對發酵液中慶大霉素C1a含量進行測定,最大相對誤差為3.98%;篩選獲得了10株高產菌株,其中AL324菌株與出發菌株相比,搖瓶效價提高了52%;通過穩定性傳代實驗,獲得了4株高產穩定性菌株。5L發酵罐驗證實驗表明AL324與出發菌株相比效價提高了81.3%。本試驗采用紫外分光光度法可以快速檢測發酵液中慶大霉素C1a含量,該方法應用于高通量篩選中,獲得了高產菌株,篩選結果表明ARTP+LiCl復合誘變方法的正突變率較高,是一種有效的慶大霉素C1a高產菌株誘變方式。

文章精彩內容如下:

4

3 分光光度法慶大霉素C1a測定標準曲線

1


8 4種不同誘變方式的24孔板初篩結果

2


10 高產穩定性菌株驗證試驗

3


11 高產菌株AL324與出發菌株過程參數對比圖

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