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原生質體ARTP誘變選育阿維拉霉素高產菌株

作者:天木生物 發布時間:2018/10/24 瀏覽量:1588

原生質體ARTP誘變選育阿維拉霉素高產菌株

中國抗生素雜志

  本期向您推薦廣東容大生物股份有限公司在《中國抗生素雜志》上發表的一篇《原生質體ARTP誘變選育阿維拉霉素高產菌株》的研究論文。

文章簡要內容如下:

  篩選獲得阿維拉霉素A含量高的菌株,進一步提高綠色產色鏈霉菌(Streptomyces viridochromogene)發酵阿維拉霉素的水平。對綠色產色鏈霉菌AVL4(S. viridochromogene AVL4)菌株原生質體制備及再生條件進行了優化,并在此基礎上,采用ARTP誘變系統對其原生質體進行了誘變研究。S. viridochromogene AVL4原生質體制備和再生的最佳條件為:以活化斜面轉接至種子搖瓶培養24h的菌絲體為出發菌絲體,以SMM溶液作為滲透壓穩定劑,采用12 mg/mL的溶壁酶,30℃酶解反應60 min。以原生質體為誘變對象,ARTP處理40s后的菌株經菌落形態初篩和搖瓶發酵復篩,獲得一株編號S251的菌株,其搖瓶發酵阿維拉霉素的生物效價較出發菌株提高19.3%,其中,阿維拉霉素A占組分含量81%,較原始出發菌株AVL4含量提高6.4%,而且斜面連續轉接五代遺傳相對穩定。另外,成功實現變株S251的50L罐發酵驗證,其產素水平最高達到4500 U/mL,較對照菌株AVL4提高27.4%。結論 ARTP處理AVL4菌株原生質體,能夠有效提高綠色產色鏈霉菌產阿維拉霉素的能力,獲得的變株S251具有非常好的生產阿維拉霉素的工業化應用潛力。

文章精選內容如下:

  根據ARTP誘變后再生菌落的形態特征,初步篩選共挑取異形單菌落32個,通過點植法移接至另一平板,最后接種至指示菌平板,以出發菌株為對照,觀察突變株的抑菌活性,檢測生物效價。其中編號S11、S28、S91和S215的菌株抑菌圈直徑較對照菌株明顯要大(抑菌圈直徑相較對照菌株超過15%),將此4株菌進行斜面保存。

  將初篩獲得的突變株斜面進一步進行搖瓶發酵復篩,以出發菌株為對照,最終得到兩株優良突變株S91和S215,其管碟法測得的抑菌圈直徑分別為15.6和16.1 mm,阿維拉霉素生物效價為705.1和727.7 U/mL,較出發菌株分別提高15.6%和19.3%。其中突變株S91的阿維拉霉素A含量為521.4 μg/mL,占組分含量約73.9%,較出發菌株A的占比含量下降2.9%。突變株S251的阿維拉霉素A含量為589.4 μg/mL,占組分含量81%,較原始出發菌株A含量提高6.4%。


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圖3 ARTP處理時間對S. viridochromogene原生質體致死率的影響

Fig.3 The hereditary stability of mutant strains 


表1 斜面傳代對突變株S251生物效價及阿維拉霉素A含量的影響

Tab.1 Effects of slope passage on biological effect and avilamycin A content of mutant S251

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